行为实验指南之悬尾实验（Tail suspension test）

悬尾实验（Tail suspension test, TST）是一种经典而又能快速评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法。该动物模型将实验动物的尾部进行固定，使其头部向下悬挂，动物在该环境中挣扎，企图摆脱该困境，在经过努力仍无法摆脱后，出现间断性不动，显示“行为绝望”状态。实验动物在该环境中拼命挣扎试图逃跑又无法逃脱，从而提供了一个无可回避的压迫环境，一段时间的实验后，记录处于该环境的动物产生绝望的不动状态过程中的一系列参数，动物的表现出的这种典型的“不动状态”，反映了一种被称之为“行为绝望状态”，这种行为绝望模型与抑郁症类似，而且对绝大多数抗抑郁药物敏感，而且其药效与临床药效显著相关，所以被广泛用于抗抑郁药物的初选。

悬尾装置，医用胶带，VisuTrack摄像跟踪系统以及分析软件（上海欣软）。推荐使用塑料悬尾实验箱，尺寸通常为55cm高* 60cm*宽* 11.5cm深。为了防止动物之间的观察或相互作用，实验箱中间有一个挡板实验动物隔开。同时保证每只动物的隔间足够宽敞，让动物碰不到悬尾箱的箱壁。每个隔间的尺寸建议不低于:55cm高* 15cm*宽* 11.5cm深这个尺寸。小鼠的鼻子和实验室箱子的地板之间的大致距离建议为20-25厘米。分析软件推荐使用VisuTrack动物行为分析软件，软件可任意截取视频，准确性高。悬尾实验与旷场实验等测试不同，不应该跟踪动物的质心/重心。VisuTrack动物行为分析软件(上海欣软)通过调查小鼠四肢的真实动作，实时分析小鼠摇摆(绝望状态)、挣扎行为等指标，自动存储原始实验视频并可进行分析，减少了人为误差。

测试方法：

1)  将已在动物房适应了三天的动物从SPF动物房中拉入实验室。SPF级动物房应设置的参数为室温（22±2℃），湿度（40±20℃）%，12 h 昼夜交替灯光使动物有正常昼夜节律，实验动物在此环境可自由摄取食物和水。

2)  将动物轻柔地从笼中拿出来，以最快的速度将其尾巴固定好，不得给小鼠造成多余的压力和应激状态。具体操作为用医用胶带粘在距离尾巴尖-端 1 cm，以便将动物的尾巴从装置悬挂杆上悬吊下来。动物尾巴尖-端与地面之间的高度约为 30 cm，使小鼠呈头倒式位。

3)  摄像镜头需提前调好，将其调到水平对准小鼠身体的位置，以便录像可呈现完-全的视野。

4)  实验总共需录视频 6 min，录像记录动物实验期间的行为，但记录后4min动物的不动时间。

5)  记录时长完成后，撕去医用胶布将实验动物小心取下来，并放回原笼中做好记录。

6)  所有动物测试完成后，及时清理仪器中的粪便和尿液。

主要的指标及行为学意义：

1)  肢体不动：当动物停止挣扎时,身体保持垂直倒悬状态,静止不动，这个指标可视为实验动物出现习得性无助后放弃挣扎的行为表现。动物在悬尾实验中的不动时间越长，表明动物的抑郁程度越重。

2)  挣扎行为：当动物出现企图挣扎、起身时的行为，动物的挣扎时间越短，表明动物的抑郁程度就更重。

数据如何统计：

记录实验动物的挣扎行为和不动时间，一般换算为以秒为单位的计量。通过与对照组进行对比，一般使用T检验即可，至于是否选择配对或未配对则需要跟自己的实验目的来选择，此处不展开说明。

（测试时长、是否可重复、大小鼠的差异、品系）

1.胶带要缠在接近动物尾巴尖-端的地方，不要缠在靠近尾巴根部的地方，这样会影响动物的活动。若太靠下动物的挣扎与活动会受到限制，影响实验结果。

2.背景板要与动物的颜色形成强烈反差，以便软件识别，推荐使用白光背光板。例如用白色小鼠时，需要选用黑色的背景板，以便视频录制清晰，易分辨；反之亦然，用黑色的c57小鼠进行实验时，则需要考虑用白色的背景板来完成衬托和凸显。

3.不同品种的小鼠悬尾实验表现不同：例如空白对照组c57小鼠不动时间较长,均值多大于100s; 空白对照组的ICR 小鼠不动时间均值多小于100 s; 抑郁行为判断标准:不动时间与对照组相比有显著性增加(P < 0. 05)即可，并不需要单纯比较不动时长。

4.悬尾实验并不建议用较重的大鼠，因为大鼠只能通过它们的尾巴来支持它们的体重，这对大鼠来说是痛苦的。同样的道理，应该注意避免使用异常重的小鼠（例如用于模拟肥胖的小鼠），在这种情况下，实验者应该寻找替代性的测试，例如强迫游泳实验。

5.动物从饲养环境带入实验环境应适应一段时间，通常至少一个小时以上。

6.实验环境应保持安静，突然大或者一直持续的噪音会使实验动物惊慌失措。

7.小鼠悬尾实验持续时间通常为6分钟。与强迫游泳实验不同，小鼠在实验初期更容易表现出不动。

8. 底部建议放置一个可拆卸的拖盘，收集粪便或尿液。

9. 悬挂后动物鼻尖与设备地板之前的参考距离在 20~25 cm 左右。

10.短时间不建议将此实验重复第二遍，以免对实验动物的心理状态产生影响。

11.测试中，前肢只有小鼠运动，后肢不动，可视为动物的绝望状态。

12.由于运动的惯性，小鼠的钟摆式活动也需要视为动物的绝望状态。

13.悬尾与强迫游泳实验相比，该实验没有因浸泡在水中而导致体温降低的风险。这两个实验在灵敏度和性能上有各种重要的差异，一个实验的结果可能无法在另一个实验中重复，故应理性看待实验结果。

14.悬挂用的胶带应牢固地粘贴在小鼠尾部和悬挂杆上，并且足够坚固以承受正在测试的小鼠的重量。但是，胶带不应该过于粘滞应保证既可以顺利固定动物，又不至于在实验结束后难以从实验动物尾部移除，胶带尺寸可尽量统一。

15.实验结束后（通常是 6 分钟），将动物放回鼠笼，应轻轻将胶带从尾巴上拉下来，不要从尾巴上撕扯胶带，避免给动物带来痛苦。

16.清洁用品，每次实验完成，收集粪便和尿液，彻-底擦拭悬挂盒等仪器设备。

17.在实验前几天和后几天推荐测试动物的行动能力，如自发活动等。目的是为了排除动物自身运动能力的影响，而更加说明是动物的抑郁程度不同而产生不动或挣扎样行为。

18.本实验在短期内不建议重复，若必须重复一般建议两次实验间隔半个月以上。

19.若是多只动物同一时间段做实验，则需要注意每只动物的间隔，以及动物与动物之间需要用不透明的挡板隔开，防止出现干扰。

悬尾实验步骤简单，时间短，在一段时间内出数据的效率很高。比起强迫游泳，关于温度没有什么太需要注意的地方，但一定要注重动物福利的落实和准确识别不动状态，做到识准、记准。

进一步探讨与展望：

悬尾试验非常适合测量引起急性抑郁症。各种类型的抗抑郁药物，例如三环类药物、选择性血清素再摄取抑制剂 (SSRI) 和单胺氧化酶抑制剂 (MAOI)、精神兴-奋-剂、精神安定药、抗焦虑药等，都已使用悬尾试验进行了测试，该模型和强迫游泳模型一样可靠，在抑郁等药物评价体系中占有不可替代的位置。